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单克隆抗体造备技术

业务征询

2016-04-14
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接见量:

服务项目布景

单克隆抗体(McAb)使用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫动物的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞 ,通过HAT筛选、ELISA抗体检测、亚克隆 ,选择出拥有排泄抗体职能又可无限滋生的杂交瘤细胞 ,出产单克隆抗体。单抗的利益是特异性、均一性、高效性和无限供给性。在免疫学、医学、生物学等领域的基础钻研和临床医学上 ,蕴含对疾病(癌症等)的诊断、预防和医治等方面 ,均显示出巨大的性命力。

单克隆抗体造备

单抗的最大优势是它的特异性、均一性、高效性和无限供给性。在免疫学、医学、生物学等领域的基础钻研和临床医学上 ,蕴含对疾病(蕴含癌症)的诊断、预防和医治等方面 ,均显示出巨大的性命力。
 
单克隆抗体造备服务为客户提供美满的造备选项 ,不仅为您造备单克隆抗体株 ,也可为您持久提供大量高纯度的抗体 ,方便客户凭据自己的需要选择最适合的服务出产线。本项技术服务重要蕴含:
- Balb/c纯系幼鼠免疫;
- 脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合;
- 抗体产生细胞的ELISA筛;
- 抗体产生细胞的亚克隆与扩增;

- 指定细胞克隆的体表造就或腹水瘤接种法出产单克隆抗体。

单克隆抗体技术流程

1、抗原表位设计:使用特有分析软件 ,以在线分析步骤为辅助 ,综合蛋白三维结构、活性位点、亲水性等成分 ,多参数预测抗原表位 ,大大提高了抗原表位的靠得住性 ,为后续的抗体造备提供了有力保障。
2、 多肽合成 ,蕴含:尺度肽合成、肽建饰、分歧纯度多肽处置、抗原多肽及其与蛋白的交联等。
3、  沉组蛋白抗原造备

(1)沉组质粒构建
(2)质粒转化
(3)诱导表白
(4)蛋白纯化
(5)蛋白鉴定

所得到的沉组蛋白 ,拥有较高的纯度和活性 ,可用于免疫动物以获得单克隆抗体。
4、 杂交瘤造备

(1)免疫动物:免疫动物的选择凭据骨髓瘤细胞株的起源而定 ,国内目前常用的骨髓瘤细胞均来自Balb/c幼鼠。免疫原可为:可 溶性抗原、颗粒性(细胞)抗原。
(2)骨髓瘤细胞的造就。
(3)豢养细胞的造备。
(4)细胞融合。
(5)HAT筛选。

5、 筛选排泄抗体的杂交瘤细胞 
通经常用的有:免疫荧光、放射免疫(RIA)、组织化学法和酶联免疫分析(ELISA)法等 ,以ELISA步骤最为常用。
6、 杂交瘤细胞的克隆化造就
经检测的杂交细胞固然排泄抗体 ,但它可能是一个杂交细胞 ,也可能是多个杂交细胞的后世所排泄的抗体 ,因而必须进行克隆化造就 ,以获得得一个寂仔克隆原性又排泄抗体的杂交瘤细胞株。
7、 单克隆抗体的大量造备
杂交瘤细胞建成之后 ,必要造备大量抗体以备使用。把杂交瘤细胞接种到幼鼠腹腔内 ,在杂交瘤成长的同时渗出大量腹水 ,腹水含有抗体 ,每毫升可达到毫克水平 ,是目前宽泛选取的步骤。
8、 抗体纯化
通常讲单克隆抗体已经是很纯的 ,在尝试钻研中能够使用 ,但由于它的起源分歧 ,可能会含有造就液的成份或鼠腹腔液等无关的蛋白质影响纯度 ,因而需用硫酸铵沉 淀法、酸楚-硫酸胺法、DEAE-纤维素法或亲和层析等步骤进行纯化。本公司重要选取亲和层析步骤 ,为客户获得高纯度的单克隆抗体。
9、 抗体鉴定

杂交瘤细胞建株后 ,还需对其所排泄的单克隆抗体的理化性质及匹敌原的特异性等进行鉴定 ,通常需进行以下工作:抗正本身的IgG亚类测定;所抗抗原分子量的测定;Western blot鉴定;ELISA效价鉴定等。

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邮箱:marketing@medicilon.com.cn

电话:021 58591500

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以上是关于单克隆抗体造备技术,单克隆抗体技术道理的内容 ,起源于J9集团官网。

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