J9集团药理学服务为您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验

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裸鼠服务流程

    1、操作规划设计
2、步骤开发
3、细胞造备
4、裸鼠成瘤

裸鼠皮下成瘤动物尝试步骤 

分组:SW620细胞组、SW620转染无关siRNA组、SW620转染主张基因（每组6只）。 
细胞筹备及注射裸鼠步骤： 到动物室筹备尝试。 

取出未作处置的幼鼠和处置后幼鼠用鼠笼

，挨次摆放在超净台中。选体形较大的幼鼠称沉

，以3μl/g剂量

，腹腔注射10％水合氯醛麻醉幼鼠。约5分钟

，幼鼠起头进入安静状态

，将其仰卧固定。切忌镇痛剂过量使用。 

(1)铺白布于鼠板上

，仰卧位固定幼鼠四爪

，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线。消毒两次。铺手术巾于幼鼠上

，在其左侧剪口（4*4cm）

，露出其左侧腹部, 用碘伏消毒一次。在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤

，露出腹壁肌肉

，镊子牵拉腹壁肌肉

，避开腹腔内脾脏

，剪开腹壁肌肉

，露出内脏。用棉签蘸PBS

，拨出脾脏下极

，切忌牵拉

，以免危险脾脏和胰腺。 
(2)找到脾脏同时

，用25微升Matrigel混合于细胞管中

，打悬细胞沉淀

，使细胞分散均匀成单细胞悬液。用BD针吸净EP管中的单细胞悬液

，稍退针芯

，打出气泡

，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门方向约2mm起头注射细胞

，注射结束停顿约30秒钟

，缓慢退出针

，以防细胞渗出。同时用蘸PBS的棉球压迫周围出血点止血。 
(3)用注射器汲取庆大霉素注射液（用生理盐水250：1稀释）约400微升

，注入腹腔

，棉球蘸干皮缘渗出的抗生素Ｆ鹜贩旌细贡诩∪猓叫旌4针）。再次用注射器汲取庆大霉素注射液约400微升冲刷缝合口

，棉球蘸干。缝合皮肤（间断缝合4针）。碘伏棉球消毒缝合口。撤除固定

，使幼鼠处于天然体位

，放于鼠笼中。 
(4)所有细胞注射结束

，剪耳象征

，纪录剪耳象征及分组情况。 
Day5-7：把稳幼鼠的状态

，实时发现幼鼠是否有因手术刺激、胰腺危险、习染等殒命的情况。 
Day42：颈茁冯断

，正法幼鼠

，解剖尸体

，观察脾脏肿瘤成长情况

，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成。所有可疑组织均做好象征

，拍照

，若有表表结节

，计数后

，冻于液氮中。视了局情况用10%甲醛溶液固定过夜后做病理。 

裸鼠皮下成瘤尝试技巧

1、细胞状态是成瘤尝试的关键

，所以细胞成长状态肯定要好

，取处于对数成持久的细胞

，细胞达80-90%左右密度为宜;网络细胞前一天晚上更换新鲜造就基。
2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍

，主张为去除细胞中的血清。
3、用PBS或者无血清造就基奏乐细胞沉淀至相宜的浓度

，通常皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支

，接种体积为0.1ml

，因而细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml。
4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下

，通常尽量在半幼时内实现

，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。
5、选择的裸鼠通常在5-8周龄

，体沉18-20g左右

，种植部位选择血供丰硕区域

，如腋窝中后部、腹股沟中上部。
6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散

，预防细胞成团而降低细胞成活率。
7、接种时

，针头在皮下进针深一点

，约1cm深

，削减注射后细胞悬液从针眼溢出。
8、若何抓牢裸鼠?左手拇指和食指抓紧裸鼠颈背部皮肤

，幼拇指夹住裸鼠尾巴。

9、接种后一周左右能够见到皮下起头出现肿块。
10、凭据肿瘤细胞的个性和接种细胞的量

，通常皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜成长过大

，通常不要超过1000mm3 

，肿瘤负荷过大常；嵋晕ケ扯锫桌矶辉又旧绲竽(由于这个问题悲凉地被plos one拒过稿）。
11、肿瘤大幼丈量通常为1周两次

，游标卡尺丈量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴

，b为短轴)。
12、皮下瘤取下后一部门冻液氮用作以来提蛋白和RNA

，一部门福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。

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